قمنا سابقا بشرح تحليل السائل المنوى من حيث اهميته وشروط عمل التحليل وكيفية تكوين الحيوان المنوى وكيفية تكوين السائل المنوي كما قمنا بشرح الخواص الفيزيائية للتحليل في المقال السابق الان سنقوم بشرح الفحص الميكروسكوبي
الفحص الميكروسكوبي Microscopical examination
يتم اجراء الفحص الميكروسكوبي على عينة سائلة Liquefied Sample اي بعد اتمام عملية الاسالة Liquefaction وهذا عن طريق تحضير wet preparation
كيفية تجهيز Wet Preparation
1 - تقليب العينة جيدا Mix wellعدة مرات برفق او التقليب باستخدام ماصة Pipettes
-2 اخذ 10 ميكرون من العينة من العبوة ووضعها علي شريحة دافئة ويتم تغطيتها بغطاء cover دافئ ويلاحظ ان يكون توزيع العينة في الشريحة متجانس Homogenous ويتم فحصها تحت الميكروسكوب على العدسة 10x و 40x بالخطوات الاتية:
1 - الفحص على العدسة 10x
يتم البحث عن الاتى :
1. خيوط المخاط Mucous Strands
2. التصاق الحيوانات المنوية مع اجسام اخري Sperm Agglutination
3. التصاق الحيوانات المنوية مع بعضها Sperm Aggregation
4. خلايا طلائية Epithelial Cells
5. Round Cells خلايا دائرية والتى تشمل :
· Leukocyte خلايا دم بيضاء
· Immature Germ Cell خلايا منوية غير ناضجة
2- الفحص على عدسة 40x
يتم فحص
1. Sperm Motility حركة الحيوان المنوى
2. Count Dilution Factor معامل تخفيف لعد الحيوانات المنوية
1 - خطوات الفحص على العدسة 10x
اولا: البحث عن تجمعات الحيوانات المنوية Aggregation
حيوانات منوية حية متجمعه مع خيوط مخاط Mucous strandsاو بقايا خلايا او حيوانات منوية ميتة متجمعة مع بعضهما البعض. ويتم ذكر النسبة او نفي وجودها وتلك التجمعاتAggregation تحدث بسبب عدوى او زيادة اللزوجة
ثانيا: البحث عن التصاق الحيوانات المنوية Agglutination
التصاق الحيوانات المنوية سويا مع بعضهم البعض وتلك الحيوانات تكون حية Viable ومتحركة motile
ويكون ذلك الالتصاق
- راس في راس head to head
- ذيل في ذيل head to head
- عنق في عنق Mid piece to mid piece
وحركتهم تكون حركة اهتزازية Frantic shaking motionاو محدودة limited ووجود الالتصاق يؤدى الى تاخر في الانجاب ومن اهم اسبابه وجود اجسام مضادة ضد الحيوانت المنوية Antibodies against sperms ومن الطبيعي عدم وجود تلك الالتصاقات وفي حالة وجودها يتم وضع النسبة كالاتى :
1 – طبقا للعدد
الدرجة الاولى Grade 1
في الالتصاق الواحد هناك اقل من 10 حيوانات ملتصقين سويا وتسمى Isolated
الدرجة الثانية GRADE 2
في الالتصاق الواحد نحو 10 – 50 حيوان منوى وتسمى Moderate agglutination
الدرجة الثالثة Grade 3
في الالتصاق الواحد اكثر من 50 حيوان منوى وتسمى Large
الدرجة الرابعة Grade 4
كل الحيوانات المنوية ملتصقة ببعض ولا يوجد اي حيوان منوى حر وتسمى Gross
2 – طبقا لموقع الالتصاقsite of agglutination
الدرجة الاولى Grade A
وهو التصاق الرأس مع الرأس Head to head
الدرجة الثانية Grade B
وهو التصاق الذيل بالذيل Tail to tail
الدرجة الثالثة Grade C
وهو التصاق طرف الذيل مع طرف الذيل Tail tip to tail tip
الدرجة الرابعة Grade D
وهى مختلطة Mixed
الدرجة الخامسة Grade E
وهي التصاق الرأس بالذيل Tangle
ثالثا البحث عن الخلايا الطلائية Epithelial cells
وغالبا تكون من النوع الخلايا الطلائية الحرشفية squamous epitheliumومصدرها المجرى البولى التناسلى genitourinary tract وفي حالة زيادتها تدل على عدوى مجرى البول
رابعا البحث عن خلايا الدم الحمراء Red blood cells
وتتواجد في حالة التهابات inflammation
خامسا البحث عن الخلايا الدائرية Round cells
وتشمل خلايا الدم البيضاء White blood cells و الخلايا المنوية الاولية الغير ناضجة Immature germ cells
ويتم كتابة الخلايا الدائرية في التقرير لصعوبة التمييز بينهم تحت الميكروسكوب ولكن يمكن التمييز بينهم عن طريق الصبغة او باستخدام Peroxidase activity test كما ان الخلايا المنوية الاولية Spermatogenic cells /Immature germ cells زيادتها تدل على سرعة وقوة تصنيع الحيوانات المنوية وغالبا نجد ان العدد قليل oligospermia او مشاكل هرمونية او التهاب اما خلايا الدم البيضاء تدمر جدار الحيوان المنوى وتؤثر على حركته بالسلب وتدمر المادة الوراثية له كما ان 5% ممن يعانون من مشاكل العقم وتاخر الانجاب يعانون من pyospermia
واسباب نزول خلايا الصديد في السائل المنوى
- العدوى ببعض انواع البكتريا ويفضل هنا عمل مزرعة سائل منوى
- الالتهابات
- امراض مناعية
- دوالى الخصية
2- الفحص على عدسة 40x
اولا حركة الحيوانات المنوية sperm motility
يتحرك الحيوان المنوى عن طريق الاسواطFlagella والتى تحصل علي الطاقة من خلال ATPمن الميتوكوندريا والذي يمكنه من الحركة و اهمية الحركة هي الوصول لعنق الرحم وقناة فالوب والوصول للبويضة لتخصيبها ويجب ان تكون الحركة قوية ومتقدمة للامام حتى يصل للبويضة كما ان الحركة مهمة في اختراق البويضة لذلك حركة الحيوانات المنوية مرتبطة بعملية الاخصاب fertilization و لذلك اختلال وضعف حركة الحيوانات المنوية asthenozoospermia يؤدى الى تاخر الانجاب
كيفية تقدير الحركة في المعمل
بعد الاسالة اي عند نصف ساعة وعلى نفس شريحة wet preparation وعلى عدسةx 40 نقوم بفحص 200 حيوان منوى ويجب فحص عدة فيلدات ويتم تقدير في كل فيلد عدد pm ثم np ثم im ويتم تغيير الفيلد وهكذا وعلى الاقل نفحص 5 فيلدات و على الاقل يتم فحص نحو 200 حيوان منوى ثم يتم تقدير النسبة المئوية لكل فئة و يجب تحضير شرحية اخري للتاكد من تقارب النسب.
ويتم تقسيمهم الى عدة فئات Motility gradeكالاتى :
1 - progressive motility (Pr)
وهنا الحيوانات المنوية متقدمة للامام active وفي خط مستقيم Linear بغض النظر عن سرعته
2 - non progressive motility(Np)
وهنا الحيوانات المنوية حركتها غير متقدمة اي انها تشمل كل انواع الحركة ما عدا المتقدمة
وتشمل الاتى :
- Random
- Spiral
- Backward
- Circular
- Spinning
ومجموع النوعين يسمى Total motility
3 – immotile (im)
سواء كانت الحيوانات المنوية حية و ميتة
المعدل الطبيعي للحركة Motility normal range
النسبة الكلية Total motilityيجب ان تكون اكثر من 40%
اسباب ضعف الحركة Asthenozoospermia causes
- مشكلة وراثة
- التدرخين
- اصابة او عدوى في الخصيتين
- دوالى الخصية
- مشكلة في افرازات الغدد الجنسية
- المخدرات كالكوكاين والحشيش
ثانيا عدد وتركيز الحيوانات المنوية sperm count & concentration
عدد الحيوانات المنوية هائل يصل الى الملايين وذلك لان الطريق وصولا للبويضة يحتوى على العديد من الصعوبات وبالتالى يحدث فقد لعدد كبير من الحيوانات المنوية في تلك الرحلة وبالتالى عند الوصول للبويضة يكون قد وصل الحيوان المنوى الاقوى والاسرع والاصح وبالتالى فأن عدد الحيوانات المنوية مرتبط بالحمل ويلاحظ ان قلة عدد الحيوانت المنوية لا يشترط ان يكون سبب قلة انتاج الخصية لها ولكن من الممكن ان يكون كثرة افرازات السائل المنوى ادت الى تخفيف العدد
تركيز الحيوانات المنوية يوضح عدد الحيوانات المنوية لكل واحد مللي من السائل المنوى وتكون وحدته number/ml ولحساب عدد الحيوانات المنوية الكلية كالاتى :
Total sperm count =sperm concentration in 1 ml * sample volume
المعدل الطبيعي Normal range
· Sperm concentration > 15 million/ml
· Total sperm count > 39 million/ejaculate
كيفية اختيار معامل التخفيف
لان العدد هائل يصل الى الملايين يجب ان يتم التعامل مع العينة عن طريق التخفيفDilution
ولتحديد معامل التخفيف Dilution factor عن طريق العدسة 40X من خلال wet preparation يتم تحديد معامل التخفيف كالاتى :
1 - في حالة وجود اكثر من 100 حيوان منوى في الفيلد الواحد يتم استخدام معامل تخفيف 1:20
اي ان 1 volume of semen : 19 volume of diluents
مثلا : 50 micron of semen : 950 micron of diluents
------------------------------------------------------------------------------------------------------------
2 - في حالة وجود 15 : 100 حيوان منوى في الفيلد الواحد يتم استخدام معامل تخفيف 1:5
اي ان 1 volume of semen : 4 volume of diluents
مثلا : 50 micron of semen : 200 micron of diluents
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------
3 - في حالة وجود اقل من 15 حيوان منوى في الفيلد الواحد يتم استخدام معامل تخفيف 1:2
اي ان 1 volume of semen : 1 volume of diluents
مثلا : 50 micron of semen : 50 micron of diluents
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------
4 - في حالة وجود اقل من 4 حيوان منوى في الفيلد الواحد لا نقوم بالعد ولكن نكتب في التقرير الاتى :
Sperm concentration = less than 1 million/ml وتسمى تلك الحالة Cryptozoospermia
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------
5 - في حالة عدم وجود حيوانات منوية يتم عمل centrifugation للعينة كالاتى :
- تقليب العينة جيدا Mix well
- اخذ ا ملل من عينة السائل المنوى ووضعها في انبوب
- وضعها في جهاز الطرد المركزي على سرعة 2000 – 3000 rpm لمدة 15 دقيقة
- اخذ 10 ميكرون من الراسب وفحصهم تحت الميكروسكوب
تقدير العدد معمليا :
1 – Choose your dilution factor according to wet preparation
2 - MIX semen sample well
3 – Mix semen with diluents & wait 3 – 5 minutes
4 – Take 10 micron from mixture and inject it to hemocytometer
5 – Leave hemocytometer 4 minutes at room temperature then examine
You can put hemocytometer in Petri dish with wet cotton to avoid dryness
معادلات عد الحيوانات المنوية
الاختلال في عدد الحيوانات المنوية Abnormal Sperms Count
عدد الحيوانات المنوية 1 مليون : 15 مليون هنا تسمى تلك الحالة Oligozoospermia اي ان عدد الحيوانات المنوية قليل وهذا من اسباب تأخر الانجاب وتلك الحالة تتميز ان الحيوانات المنوية حركتها ضعيفة ومشوهة في الشكل واسبابها :
1 – مشكلة ما قبل الخصيتين Pretesticular مثل :
- انخفاض الهرمونات التناسلية المحفزرة لانتاج الحيوانات المنوية Hypogonadism
- بعض الادوية / التدخين / الكحول
2– مشكلة في الخصيتين Testicular مثل :
- التقدم في العمر
- خلل وراثي في كروموسوم Y
- اورام
- دوالى الخصية
3 – مشكلة في الانابيب بعد الخصية Post testicular
- انسداد القنوات الناقلة
- التهاب البروستاتا
- انسداد القنوات القذفية
ثالثا : حيوية الحيوانات المنوية Sperms vitality
والتى توضح نسبة الحيوانات المنوية الحية والميتة وهي مؤشر هام جدا في التقرير
1 - حيوانات منوية حية ولا تتحرك Viable &immotileهذا بسبب مشاكل في الاسواط Structural defect of flagella
2 - حيوانات منوية ميتة وغير متحركة تسمى Necrozoospermia وهى مؤشر الي Epididymal pathology
اسباب موت الحيوانات المنوية
- العدوى Infection
- زيادة فترة الامتناع عن الجماع Prolonged abstinence
- اصابات الحيل الشوكى Spinal cord injuries
- اختلال وظيفة الخصييتن Testicular dysfunction
- اختلال وظيفة البربخ Epedidmis dysfunction
- انخفاض الهرمونات الجنسية Hypogonadism
- اورام الخصية المبكرة Early testicular cancer
- ارتفاع درجة حرارة الجسم High body temperature
- وجود اجسام مضادة للحيوانات المنوية Anti sperm antibodies
- دوالى الخصية Varicocele
- التعرض بعض السميات Exposure to toxins
تقدير الحيوية معمليا
بعد اتمام عملية التسييل Liquefaction يتم صبغة حجم من السائل المنوى وفحصه تحت الميكروسكوب ويتم وضع نسبة الحيوان المنوى الحي والميت وهناك عدة طرق يمكن استخدامها للصبغة :
1 – Eosin stain
من اسهل واسرع الطرق وتكون كالاتى :
1. Mix semen well and take 5 micron
2. Add 5 micron eosin stain On slide And mix well
3. Wait 30 sec Then examine
ويكون تعامل الحيوانات المنوية مع الصبغة كالاتى :
في حالة الحيوانات المنوية الحية Viable يكون جدارها سليم وبالتالى لا يتم صباغتها Membrane intact sperm ويظهر باللون الابيض او وردي فاتح جدا
وفي حالة الحيوان المنوى الميت Dead sperm يكون جداره تالف وبالتالى يأخذ من الصبغة Membrane damaged sperm ويظهر باللون الوردي الغامق
2 – Eosin nigrosin stain
هنا يتم اضافة صبغة النيجروسين للايوسن لان صبغة النيجروسين تميز الحيوان المنوى اكثر عن خلفية الشريحة Contrast background وبالتالى يسهل فحصها
رابعا : شكل الحيوان المنوى Morphology
يتم عمل صبغة وفرد فيلم للحيوانات المنوية Sperms film حيث ان الصبغة تقوم بتلوين كل جزء في الحيوان المنوى الى لون محدد
شكل الحيوان المنوى الطبيعي Normal morphology
- مقدمة الرأس تعطي لون ازرق فاتح وتشير الى منطقة Acrosome
- خلفية الرأس تعطي لون ازرق غامق وتشير الى منطقة Postacrosomal
- العنق تعطي لون احمر خفيف
- الذيل يعطي لون ازرق محمر
1 – الرأس تكون كالاتى
- ناعمة Smooth
- منتظمة Regular
- بيضاوية Oval
- وضوح مقدمة الرأس Well defined Acrosome
2 – العنق تكون كالاتى :
- اسطوانى Cylindrical
- منتظم Regular
- طوله يساوى طول الراس تقريبا Head length
- في نفس محور الرأس وينتهي بالذيل
الشكل الغير طبيعي للحيوانات المنوية Abnormal morphology
- اختلال الشكل Malformation
- التكوين المختل للحيوانات المنوية Defective Spermatogenesis
- مشاكل البربخ Epididymal pathologies مرتبطين بتشوه الحيوانات المنوية
1 – تشوهات الراس Dead defects
- حجمها كبير Large
- حجمها صغير Small
- ممدودة قليلا Tapered
- تشبكة الكمثري Pyriform
- دائرية Round /Globozoospermia
- تحتوى على فجوات Vacuolated
- يحتوى على رأسين Double head
- غير منتظمة Amorphous
- راس ذو اكروسوم صغير Small Acrosome
- عدم وجود اكروسوم No Acrosome
- اختلاط بين اكثر من نوعين خلل Combination
2 - خلل العنق Neck defect
- تداخل العنق مع الرأس جانبية Asymmetrical insertion into head
- تداخل العنق مع الرأس منحنى بشدة Sharply bent
- العنق رفيع جدا Thin
- العنق سميك Thick
- غير منظم الشكل Irregular
- تجمع اكثر من خلل في العنق Combination
3 - خلل الذيل Tail defect
- ذيل قصير Short
- ملفوف coiled
- اكثر من ذيل Multiple
- عرض الذيل غير منظم Irregular tail
- مكسور broken
- تجمع اكثر من خلل في الذيل Combination
تقدير الاشكال معمليا
1 – فرد السائل المنوى علي الشريحة و قبل البدء يجب تقليب العينة جيدا ووضع 10 ميكرون من السائل المنوى علي الشريحة وفردها مثل فيلم الدم
2 – ترك الشريحة تجف Drying في الهواء
3 – التثبيت Fixation وضعها في المثبت Fixating لمدة 15 ثانية
4 – الصبغة Staining
· وضعها في المحلول رقم 1 eosinophilic xanthenes
· ثم وضعها في المحلول رقم 2 basophilic thiazine لمدة 5 ثوانى
· غسلها بالماء حوالى 15 مره
· وضع نقطه زيت وفحص نحو 200 حيوان منوى
الى هنا ننتهى من شرح هذا المقال لا تنسى مراجعة قياس الخواص الفيزيائية للسائل المنوى
تعليقات
إرسال تعليق