المحاضرة 13 : تحاليل التيفود والبروسيلا Widal & brucella tests

الان سوف نتعرف على تحاليل التيفود والبروسيلا وما اعراض كل منهما وطريقة العدوى وكيفية اجراء التحاليل داخل المعمل

تحاليل التيفود والبروسيلا 

من اخطر الامراض التى تصيب الانسان والتى يجب اكتشفاها مبكرا ويجب معرفة طرق الوقاية منها سنتعرف على طريقة التشخيص وما هي التحاليل التى تكشف عنها الان

اولا : تحليل التيفود Widal test

إن تحليل فيدال Widal Testهو تحليل يستخدم في تشخيص الحمى المعوية Enteric Fever أو ما يعرف بالتيفود  Typhoid وتعد حمى التيفويد عدوى بكتيرية يمكنها أن تنتشر في جميع أنحاء الجسم ويؤدي عدم علاجها إلى مضاعفات خطيرة،  

 تحدث الاصابة بسبب  بكتيريا salmonella وهى بكتيريا عصوية متحركة سالبة لصبغة جرام gram negative bacilli ومنها اكثر من 1400 نوع مصلي sero types  بعضها يسبب امراضا للانسان ومنها عدة اجناس اهمها 

-s typhi ,s para typhi والتى تسبب مرض حمى التيفود

-s typhimurium و s enteretidis والتى تسبب مرض التسمم الغذائي ومرض التهاب القولون

- s.choleraesuis الذي يسبب مرض تسمم الدم


لذا يستخدم تحليل فيدال في تشخيص الحمى المعوية، وهو مرض يهدد الحياة، وينتج عن أنواع معينة من عدوى بكتيريا السالمونيلا Salmonella Enterica Serotype ، والتي تنتقل عادة من فرد إلى آخر عن طريق الأطعمة والمشروبات الملوثة بالبراز.

توجد اختبارات أخرى يمكن إجراؤها لتشخيص الحمى المعوية، بدل  تحليل Widal Test، مثل مزرعة الدم للكشف عن بكتيريا السالمونيلا خلال الأسبوع الأول من الإصابة، أو مزرعة البراز، أو مزرعة البول، أو مزرعة من نخاع العظم

اسباب إجراء تحليل فيدال

في حالة ظهور تلك الاعراض

ارتفاع درجة الحرارة إلى 39، أو 40 درجة مئوية - الصداع - التعب الشديد - آلام البطن - الإسهال أو الإمساك

فقدان الوزن - الطفح الجلدي Rose Spots - النزيف المعوي الحاد.

ينصح بتشخيص عدوى التيفود مبكراً من أجل علاجها باستخدام المضادات الحيوية 

طرق انتقال العدوى

قد تنتقل حمى التيفود عن طريق البكتيريا التي تنتقل عبر الطعام، أو الماء ملوث و قد يؤدي تلوث إمدادات مياه الصرف الصحي بالبكتيريا أو ببراز شخص مصاب إلى تلوث الأنظمة الغذائية المروية من هذه الإمدادات، وقد تعيش البكتيريا لأسابيع في الماء

انواع البكتيريا المسببة للمرض

تحتوى بكتيريا السالمونيلا على 3 انواع من المستضدات  Antigens وهى

- جسم البكتيريا somatic والذي يرمز له ب O Antigen

- السوط flagella والذي يرمز له ب H Antigen

 - الكبسولة capsule والذي يرمز لها ب K Antigen

وبالتالي فان اختبار الفيدال هو تحليل من تحاليل الدم التى تكشف عن وجود مرض التيفود الذي تسببه بكتيريا السالمونيلا للكشف عن الاجسام المضادة الخاصة بالبكتيريا السالمونيلا من النوع IGM , IGG في دم المريض

 ويتميز هذا الاختبار بسهولة عمله وحساسيته اذا تم عمل الاختبار بطريقة التخفيف واختبار الفيدال هو للكشف عن الاصابة بانواع معينة للسالمونيلا هما typhi , s para typhis فقط اما بقية الانواع فيتم الكشف عنها بطريقة المزارع في معمل الميكروبيولوجى وبالتالي فان الاختبار يبحث عن الاجسام المضاده المتكونة في جسم المصاب واهم هذه الاجسام المضاده

• جسم البكتيريا somatic والذي يرمز له ب O Antigen
• لسوط flagellar والذي يرمز له ب H Antigen
• السالمونيلا من النوع para typhi A
• السالمونيلا من النوع para typhi B

تظهر الأجسام المضادة من نوع O أولاً عند الإصابة بحمى التيفويد ، إذ تظهر بعد 6-8 أيام من الإصابة، ولكنها تستمر لفترة أقصر، إذ تنخفض بعد حوالي ستة أشهر، بينما تظهر الأجسام المضادة من نوع H بعد 10-12 يوم، وتستمر لفترة أطول.

دقة اجراء التحليل

احيانا  يعطي نتيجة إيجابية كاذبة ومن الحالات التي قد يعطي فيها التحليل نتائج إيجابية كاذبة 

False positive مثلا  قد يعطي تحليل Widal Test نتائج إيجابية خاطئة عند الأفراد الذين تم تطعيمهم سابقاً ضد التيفود او عند الأفراد المصابين بالاضطرابات المناعية ، أو أمراض الكبد المزمنة.

كما  أن استخدام المضادات المضادات الحيوية قد يعطي نتيجة سلبية كاذبة False negative لتحليل فيدال، إذ يكون الفرد مصاب بحمى التيفود في حين أن نتيجة التحليل سلبية.

كيفية اجراء التحليل

مبدأ الاختبار هو اضافة Reagent الى يحتوى علي Antigen الي السيرم الذي يحتوى علي الاجسام المضاده 

اذا حدث Agglutination اذا فالاختبار ايجابي واذا لم يحدث Agglutination اذا فالاختبار سلبي



اولا تحضر جميع المحاليل Reagents وعينات المرضىSerum في درجة حرارة الغرفة.

ثانيا يوضع 20 ميكروليترمن Positive control في الحجرةالأولى Well على شريحة اللاتكس و 20ميكروليترمن Negative control في الحجرة الثانية وذلك من أجل المقارنة بعد خروج نتائج الاختبار مع الكنترول والتأكد من أن المحاليل Reagents سليمة وصالحة للاستخدام.

ثالثا يوضع 20 ميكروليترمن المصل Serum في كل حجرة Well.

رابعا تمزج محاليل اللاتكس المحتوية على الأنتيجينات لكل أنواع السالمونيلا بالتقليب ثم تؤخذ 40 ميكروليتر منها الى كل حجرة المحتوية على مصل المريض.

خامسا تمزج Mix بشكل دائري باستخدام الأعواد المناسبة وتقلب لمدة 1 – 3 دقائق .



النتيجة:

- حدوث تجلط Agglutination (Ab-Ag Reaction is positive)

- عدم حدوث تجلط Agglutination (Ab-Ag Reaction is negative)

في حالة حدوث تجلط Agglutination لابد من عمل التخفيف للعينة

تخفيف العينة Dilution of Sample

1- يفضل عمل التخفيف في أنابيب Tubes ويوضع في كل أنبوب 100 ميكروليترمن الـNormal Saline ويوضع في الأنبوب الأول 100 ميكروليترمن عينة المصل Serum وتمزج وينقل إلى الأنبوب الثاني 100 ميكروليتروهكذا إلى آخرأنبوب في أنابيب التخفيف بعد ذلك ينقل من كل أنبوب 100 ميكروليترإلى الحجرات في شريحة اللاتكس ويضاف المحلول Reagentsعلى كل الحجرات Wells .

2- يتم تسجيل آخر تخفيف ظهر فيه التفاعل إيجابي (+) كنتيجة نهائية للاختبار


قد تختلف مقدار وطريقة التخفيف من شركة مصنعة لأخرى


ملحوظة 

- تظهرالأجسام المضادة في مصل المريض بدءا من اليوم السابع إلى العاشرمن المرض (يظهرالجسم المضاد O بعد 7 أيام بينما يظهرالجسم المضادH بعد 10-12 يومًا)

- مع العلاج يقل عيارالجسم المضاد O بينما يبقى الجسم المضاد H لفترة طويلة

- يشيرالجسم المضاد الإيجابيO إلى حدوث عدوى حديثة بينما يشيرالجسم المضاد H الإيجابي إلى وجود عدوى قديمة .

النسب الطبيعية Normal range

ثانيا  تحليل البروسيلا Brucella test

وهوعبارة عن بكتيريا عصيات سالبة الجرام غيرمتحركة وغيرمغلفة والتى تسكن في الأمعاءالدقيقة ، تسبب مرض الحمى المالطية  Malta fever  وهذه العدوى تنتقل من الحيوانات إلى الإنسان. في أغلب الحالات، يُصاب الأشخاص عن طريق تناول مشتقات الحليب الخام أو غير المُبستَرة. وفي بعض الأحيان، قد تنتقل البكتيريا المتسببة في الإصابة بداء البروسيلات عن طريق الهواء أو التعامل المباشر مع الحيوانات المصابة.

تنتقل البكتيريا عند تناول مشتقات الحليب الخام في  الحيوانات المصابة إلى البشر في اللبن غير المبستر، والآيس كريم، والزبد، والجبن. يمكن أيضًا أن تنتقل البكتيريا في لحوم الحيوانات المصابة النيئة أو غير المطهوَّة جيدًا و استنشاق الهواء الملوَّث تنتشر بكتيريا البروسيلا بسهولة في الهواء و لمس دم وسوائل جسم الحيوانات المصابة كما ان الجلد الغير سليم تدخل البكتيريا الجسم عبرالجلد والجروح

من أعراضه الحمى، وألم المفاصل، والإرهاق. يمكن علاج هذه العدوى عادةً بالمضادات الحيوية. إلا أن العلاج يستغرق مدة تتراوح ما بين عدة أسابيع إلى عدة أشهر، وقد يتجدد حدوث العدوى.

يصيب المرض  مئات الآلاف من البشر والحيوانات في جميع أنحاء العالم. قد يساعد تجنب تناوُل مشتقات الحليب الخام واتخاذ الإجراءات الوقائية عند التعامُل مع الحيوانات أو العمل في أحد المختبرات إلى الوقاية من الاصابة


يتم التشخيص  إما بعد اختبار عينة من الدم، أو نخاع العظم بحثًا عن بكتيريا البروسيلا، أو عن طريق اختبار عينة من الدم بحثًا عن الأجسام المضادة لهذه البكتريا واحيانا يلجأ الطبيب الى المزيد من الفحوصات مثل:

الأشعة السينية حيث  تكشف عن التغيرات التي تحدث على العظام والمفاصل كما ان  التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) يساعد على اكتشاف الالتهابات كما ان اختبار السائل الدماغي النخاعي يُجرى فيه اختبار بحثًا عن عدوى مثل التهاب السحايا أو التهاب الدماغ.

الاعراض 

قد تظهرالاعراض بعد الإصابة بالعدوى خلال مدة تتراوح من بضعة أيام إلى بضعة أشهر. وتشبه اعراض  الإنفلونزا 

 وتشمل:الحمى - فقدان الشهية - التعرق - الضعف - الإرهاق - ألم بالمفاصل والعضلات والظهر - الصداع

قد تختفي الاعراض لأسابيع أو أشهر ثم تعود تصبح عدوى البروسيلا مزمنة لدى بعض الأشخاص مع وجود أعراض مستمرة لسنوات تشمل إرهاق - حمى متكررة - التهاب الغشاء الداخلي المبطن لحجرات القلب - التهاب المفاصل - التهاب مفاصل عظام العمود الفقري  - التهاب المفاصل الواصلة بين العمود الفقري والحوض 

انواع البكتيريا 

•  Brucella abortus الذي يصيب الماشية (الأكثرشيوعًا)
•  Brucella melitensis الذي يصيب الماعز والأغنام (الأخطر).

مضاعفات المرض

يمكن للبروسيلا ان تصيب الجهاز التناسلي والكبد والقلب والجهاز العصبي المركزي ومن مضاعفاته ما يلي:

- التهاب الغشاء الداخلي المبطن لحجرات القلب  هذا هو أخطر مضاعفات عدوى البروسيلا. يمكن للالتهاب الغير معالج أن يدمر صمامات القلب وهو السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بعدوى البروسيلا.

- التهاب المفاصل من أعراض التهاب المفاصل الشعور بألم في المفاصل وتورُّمها وخاصة في الركبتين والمعصمين والعمود الفقري. قد يصعب علاج التهاب مفاصل العمود الفقري أو المفاصل التي تربط بين أسفل العمود الفقري والحوض  وقد يُسبِّب ضررًا دائمًا.

- الالتهاب والعدوى في الخصيتين 

- كذلك يمكن  أن يؤثر داء البروسيلا على الطحال والكبد؛ فيزيد حجمهما عن الحجم الطبيعي.

- عدوى الجهاز العصبي المركزي يشمل ذلك الأمراض المحتملة التي تهدد الحياة؛ مثل اللتهاب السحايا أو التهاب الدماغ نفسه.

الوقاية من المرض

- تجنب الأطعمة التي تحتوي على منتجات الألبان غير المبسترة

- طهو اللحوم جيدًا

- ارتد القفازات عند التعامل مع الحيوانات المريضة أو الميتة أو الأنسجة الحيوانية أو عند مساعدة الحيوان أثناء الولادة.

التشخيصDiagnosis

- اختبار الأجسام المضادة  لتشخيص داء البروسيلا.

- Brucella IgG and IgM  حيث ان الأجسام المضادة IgM تتطور في وقت مبكرمن داءالبروسيلا وتظل موجودة لعدة أسابيع إلى أشهرمن التعافي. تتطورالأجسام المضادة IgG في وقت لاحق ويمكن أن تستمرلعدة أشهرإلى سنوات بعد الشفاء.

طريقة اجراء التحليل Procedure

نفس طريقة اختبار فيدال

العلاج 

تتجه علاجات داء البروسيلا إلى تخفيف الأعراض وتجنب المضاعفات و المعالجة بالمضادات الحيوية لمدة ستة أسابيع على الأقل .




تم شرح الطرق العملي للتحاليل بدقة في هذا الفيديو