لتحليل المزرعة اهمية كبيرة حيث انها تكشف عن البكتيريا ونوعها والمضاد الحيوي المسبب للعدوى ويمكن عمل التحليل لاي حالة التهاب او عدوى لذلك سنقوم بشرح كل التفاصيل .
انواع العينات المستخدمة في عمل المزارع
1 - عينات المسحات(swabs) وهي تشمل الآتي :
- مسحة من العين (Eye swab)
- مسحه من الأنف (Nasal swab)
- مسحه من الحلق (Throat swab)
- مسحه من الجروح (Wound swab)
- مسحه من المهبل (Vaginal swab)
- مسحه من الشرج (Rectal swab)
2 - عينة بول Urine sample
3 - عينة براز Stool sample
4 - عينه من سوائل الجسم المختلفه مثل:
- Csf
- سائل من الركبه knee aspirate or synovial fluid
- عينه من غسيل المعده Gasteric wash
- سائل من الرئه pleural fluid
- سائل من البطن Ascetic fluid
5 - Semenal analysis
6 - Sputum
Blood - 7
8 - Milk examination
انواع الميديا المستخدمة في المزارع Media of culture
1- الاجار الشكولاتى Chocolate Agar .
وهو بيئة غنية ب Enriched Media و يحتوى هذا النوع من الاجار على عوامل X,V الناتجه عن انفجار كرات الدم الحمراء والتى تساعد على نمو البكتريا التى تنمو بصعوبه مثل النيسريا Neisseria
2- Blood Agar
وهو بيئة غنية بـ Enriched Media وهى بيئة تفرق بين البكتريا المحللة للدم عن طريق التحلل الكامل للدم Beta Hemolytic مثل Strept .Agalactiae – Pyogenes او البكتريا المحلله جزئيا للدم مثل Alpha Hemolytic مثل Strept Viridams –Pneumonia او البكتريا غير المحللة للدم مثل Bovis – Fawcalills
.png "blood agar")
3 - ماكونكى اجار MacConkey Agar .
وهى تعتبر بيئه مفرقة للبكتريا المخمرة للاكتوز مثل Enterobacter – Klebsiella والغير مخمرة للاكتوزمثل
protus – Shigella – Salmonella
.png "macconkey agar")
4- CLED" Stine Lactose Electrolyte Deficient "
وهى وسط جيد جدا لزراعه البول يمكنه التفريق بين البكتريا المخمرة للاكتوز والغير مخمره له ولها نفس خصائص الماكونكى
.png "cled agar")
اسباب وجود الصديد في البول
1 - عدوى بكتيرية فى ( الكلى – الحالب – المثانه - التهاب فى البروستاتا )
يلاحظ هنا ان البكتريا التى تصيب الكلية والمثانة ( الجهاز البولى ) تختلف عن البكتريا التى تصيب البروستاتا ( الجهاز التناسلى ) لذلك لابد ان نزرع كل عينة على الميديا المخصصة لها فمثلا عينة البول تزرع على ميديا خاصة بالبول مثل CLED واذا لم تكن هذه الميديا متوفرة نزرع على ميديا الدم Blood agar
اما في حالة العدوى البكتيرية الجنسية تصيب الجهاز التناسلى مثل البروستاتا فهذا يعنى ان هذه البكتريا قد لاتنمو على ميديا الدم Blood a agar وخصوصا ال chlamydia وايضا بكتريا السيلان Neisseria Gonorrhea التى تحتاج الى ميديا خاصة Thayer Martin agar or chocolate agar و فى حالة الاصابة بالسيلان يؤخذ العينة urethra discharge
فى حاله عدوى البكتيرية للبروستاتا bacterial prostatitis يؤخذ عينة prostatic discharge من urethra بعد ان يقوم الطبيب بعمل مساج لغدة البروستاتا من خلال فتحة الشرج وتزرع على ميديا blood - MacConkey chocolate
2 - التهاب فيروسى او مناعى
قد يصيب الجهاز البولى او الجهاز التناسلى عدوى فيروسية او التهاب مناعى ( فى الكلية ) او احتقان ( فى البروستاتا ) او اى شئ غير بكتيرى يؤدى الى وجود صديد بدون نمو بكتيرى على الميديات المخصصة للبول فيؤدى ذلك الى مايعرف ب Sterile pyuria
ما هو مصطلح Sterile pyuria
في حالة وجود اعراض مثل حرقان فى البول / سخونية / وجع بالجنب / بول متقطع وغيرها ووجود في تحليل البول
- Pus Cell is High
- Nitrite is Positive
- Protein is Positive
- Sometimes RBCs Found
يتم عمل مزرعة البول ويأخذ المريض مضاد حيوي ويتم القضاء على الميكروب لكن هناك بعض الحالات نجد ان
نسبة صديد عالية جدا مثلا Pus Over 100 وعند عمل المزرعة لا يحدث نمو للبكتيريا No-growth وهذا يرجع لعدة اسباب وهى :
- المريض تناول مضادات حيوية Intake Antibiotic
- عن طريق الجنـــس مثل بكتيريا Gonorrhea
- اصابة فيروسية
- اصابة فطريةFungal infection
- الاصابة ب Trichomonas vaginalis
- حصوات الكلى Renal stones
- البلهارسيا البولية Urinary bilharziasis
وتسمى تلك الحالة Sterile pyuria او ما يعرف باسم الصديد العقيم وتكون نتيجة المزرعة كالاتى
No growth, May Be Sterile pyuria
ما هى مزرعة البول Urine culture
اسباب عمل التحليل
- الم فى الاعضاء التناسليه
- مرض البول الصديدى ويعنى وجود كمية كبيرة من الصديد بالبول
- وجود بكتيريا بالبول
- امراض الكلى
- التهابات مجري البول والتى ينتج عنها وجود كمية كبيرة من الصديد بالبول
شروط اخذ العينة
- يجب غسل الاعضاء التناسلية بمطهر مثل الديتول وبعد ذلك غسل الاعضاء التناسلية بالماء لازاله اثر المطهروافراغ اول نقاط من البول خارج الاناء المخصص وباقى العينة فى الاناء المخصص .
- يجب ارسال العينة مباشرة الى المعمل لبدء العمل بها .
- عدم تناول المريض اى مضاد حيوى قبل اجراء المزرعة بمدة 48 ساعة
- عدم تناول المريض اى مضاد حيوى قبل اجراء المزرعة بمدة 48 ساعة
كيفية عمل التحليل
1 - يتم فحص العينة بواسطة الميكروسكوب لتحديد نسبه الصديد وكرات الدم الحمراء والخلايا البشريه والبكتيريا.
2 - باستخدام اللوب بعد تعقيمة بالنار (بواسطه لهب) يتم غمسه بعينة البول ويتم زراعته على كلا من (blood agar) و(macconkey agar) ويتم بعد ذلك تحضين العينة لمدة 24 ساعة .
3 - على (macconkey agar) من الممكن ظهور الاتى :
* ظهور البكتيريا بلون روز ونوع البكتيريا فى هذه الحاله (E-Coli) او (klebsiella) و نفرق بين النوعين من البكتيريا بواسطه اختبار كميائى بسيط وهو(indole test) اذاكان ايجابى اذا نوع البكتيريا (E-coli) واذا كان سلبى اذا نوع البكتيريا (klebsiella)
* ظهور البكتيريا بلون اصفر باهت ونوع البكتيريا فى هذه الحاله (proteus) او (pseudomonas).
نفرق بين النوعين من البكتيريا بواسطه اختبارين كميائيين وهما :
*(urease test) ويكون ايجابى فى حاله (proteus)
*(oxidase test) ويكون ايجابى فى حاله (pseudomonas)
4 - بالنسبه لـ (blood agar) نفحص هل البكتيريا محلله للدم ام لا hemolysis or non hemolysis
5 - يتم عمل فيلم الصبغة Gram stain للتعرف على نوع البكتيريا سالبة ام موجبة .
6 - اختبار الحساسية sensitivity test حيث يتم نقل جزء بسيط من البكتيريا باستخدام اللوب الى طبق اخر يحتوى على (nutrient agar) وتوزيعها فى الطبق بالكامل وبعد ذلك يتم وضع المضاد الحيوى وهى اقراص جاهزة للاستعمال مباشرا ويتم توزيع الاقراص بشكل منتظم
* ظهور البكتيريا بلون روز ونوع البكتيريا فى هذه الحاله (E-Coli) او (klebsiella) و نفرق بين النوعين من البكتيريا بواسطه اختبار كميائى بسيط وهو(indole test) اذاكان ايجابى اذا نوع البكتيريا (E-coli) واذا كان سلبى اذا نوع البكتيريا (klebsiella)
* ظهور البكتيريا بلون اصفر باهت ونوع البكتيريا فى هذه الحاله (proteus) او (pseudomonas).
نفرق بين النوعين من البكتيريا بواسطه اختبارين كميائيين وهما :
*(urease test) ويكون ايجابى فى حاله (proteus)
*(oxidase test) ويكون ايجابى فى حاله (pseudomonas)
4 - بالنسبه لـ (blood agar) نفحص هل البكتيريا محلله للدم ام لا hemolysis or non hemolysis
5 - يتم عمل فيلم الصبغة Gram stain للتعرف على نوع البكتيريا سالبة ام موجبة .
6 - اختبار الحساسية sensitivity test حيث يتم نقل جزء بسيط من البكتيريا باستخدام اللوب الى طبق اخر يحتوى على (nutrient agar) وتوزيعها فى الطبق بالكامل وبعد ذلك يتم وضع المضاد الحيوى وهى اقراص جاهزة للاستعمال مباشرا ويتم توزيع الاقراص بشكل منتظم
7 - يتم وضع الطبق بالحضان لمدة 24 ساعة بعد ذلك يتم رؤيه الطبق بمجرد النظر وملاحظة اكثر الاقراص قامت باكل البكتيريا والقضاء عليها.
اشهر البكتيريا التى تصيب الجهاز البولى
من اشهر انواع البكتيريا التى تصيب الجهاز البولى وتسبب Urinary tract infection UTI هى بكتريا E coli حيث ان نسبة اصابة للمجارى البولية بنسبة 90 % ويليها بالترتيب على حسب نسبة الاصابة
Klebsiella
من اشهر انواع البكتيريا التى تصيب الجهاز البولى وتسبب Urinary tract infection UTI هى بكتريا E coli حيث ان نسبة اصابة للمجارى البولية بنسبة 90 % ويليها بالترتيب على حسب نسبة الاصابة
Klebsiella
- pseudomonas
- proteus
- other gram -ve bacteria
- Staph aureus
معرفة نوع البكتيريا عن طريق صبغة الجرام Gram stain
نقوم بفرد فيلم للبكتريا بعد نموها على المزرعة وذلك لتساعدنا فى تشخيص البكتريا اذا كانت ( سالبة – موجبة ) للجرام وهذه الخطوة مهمة لانها تحدد الطريق المتبع فى اكمال المزرعة بمعنى انه اذا كانت البكتريا ايجابية للجرام فان لها طرق وانواع من المضاد الحيوى التى تستخدم اما اذا كانت سالبة للجرام فان هناك انواع اخرى للمضادات المستخدمة .
تتم الخطوات كالاتى :
1 - اخذ مستعمرة COLONY من طبق الاجار المزروع ونقوم بوضع 50 ميكرون محلول ملح او الماء ونقوم بخلط المستعمرة مع محلول الملح او الماء ونقوم بتثبيت الشريحة على اللهب بشكل سريع اربع مرات .
2 - نقوم بعمل فيلم لصبغه الجرام وذلك لمعرفه ما اذا كان البكتريا ايجابيه للجرام او سالبه للجرام ففى حاله انها تكون ايجابيه تاخد لون البنفسجى و فى حاله انها تكون سلبي تأخذ اللون الاحمرو طريقه عمل الفيلم كالاتى :-
3 - نقوم بوضع نقطتين من صبغة (crystal violet)على الفيلم ويترك لمدة 2-3 دقائق
4 - نقوم بغسل الشريحه بالماء المقطر للتخلص من بقايا الصبغة
5 - نضع محلول اليود iodine solution على الشريحه ويترك من 2-3 دقيقه
6 - نقوم بغسل الشريحة بالماء المقطر للتخلص من بقايا اليود
7 - نضع الكحول بعد ذلك لمدة 2-3 دقائق
8 - نقوم بغسل الكحول بالماء المقطر
9 - نضع صبغه Carbol fuchsin مخففه ويترك لمدة 5 دقائق ثم نقوم بغسل الفيلم وفحصه بالعدسه الزيتيه Oil immersion ومعرفة نوع البكتيريا من حيث الشكل هل هى موجبه الجرام ام سالبه الجرام حيث ان الموجبه تظهر باللون الازرق والسالبه باللون الاحمر.
.png "gram stain steps")
التعرف علي شكل المستعمرة المتكونه علي الطبق Identification of isolated bacteria
On solid media علي الاجار الصلب يمكن ملاحظة اشكال البكتيريا كالاتى :
1 - التحلل علي اجار الدم Heamolysis on blood agar
- Comlete heamolysis (B) as in staph aureus, strept. Pyogenes
- Partial Heamolysis(ALPHA) as in strept. Viridance
- Double zone (Inner complete and outer partial) as inclostridium. Perfringens
2 - الحركة علي الاجار
proteus (swarming appearance)
3 -حجم المستعمرة Colony size
- Microscopic as Mycoplasma
- Small as strep, corynebacterium, pasteurella
- Medium as Enterobactericea
- Large as B. Anthracis
- Very large as fungal colonies
- Creamy in staph. Aureus
- yellow in corynebacterium
- Greyish in streptococcus
- green in p. Aerogenosa
5 - ارتفاع المستعمرة عن طبق الزرع Elevation.
مسطحه Flat او مقعره convex او شكل نقطه الماء
6 - الحدود Margin.
- Circular دائريه
- irrigularغير منتظمه
- created or serrated متعرجه مسننه
- Rhizoid, branching متبرعمه متشعبه
- wooly thread like شكل خيوط الصوف
5 - القوام Concistancy
- Smooth semi transparent or glistening لامعه وناعمه
- Rough خشنه ومطفيه
- watery مائيه
- Mucoid appearance as in klebsiella spp.
العد البكتيرى Bacterial Count
وهو كمية البكتيريا في العينة ويمكن ان نجد نسبتها كالاتى :
- 10,000
- 10,000 - 100,000
- More than 100,000
في حالة More than 100 000/ml تعنى ان العدوى شديدة ويجب اخذ علاج وهذا الرقم يفيد في معرفة مدى كفائة العلاج حيث ان نزول هذا العدد تكون اشارة جيدة اما في حالة ثباته بعد العلاج هنا يلجأ الطبيب لتغيير هذا العلاج .
تم شرح تفاصيل اخذ العينات المناسبة في هذا الفيديو
تم شرح تفاصيل تحضير الميديا بكل انواعها في هذا الفيديو
تعليقات
إرسال تعليق